Nguyên tắc chung để định lượng các chủng nấm men probiotic trong các mẫu thức ăn chăn nuôi được quy định như thế nào?

Nội dung chính

• Nguyên tắc chung để định lượng các chủng nấm men probiotic trong các mẫu thức ăn chăn nuôi được quy định như thế nào?
• Kiểu hình đặc trưng của khuẩn lạc Saccharomyces cerevisiae trên thạch dextrose chloramphenicol (oxytetracyclin) chất chiết nấm men như thế nào?
• Thiết bị, dụng cụ để định lượng các chủng nấm men probiotic trong các mẫu thức ăn chăn nuôi được quy định như thế nào?

Nguyên tắc chung để định lượng các chủng nấm men probiotic trong các mẫu thức ăn chăn nuôi được quy định như thế nào?

Theo quy định tại Mục 4 Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 13516:2022 về Thức ăn chăn nuôi - Phân lập và định lượng các chủng nấm men probiotic thì:

Nguyên tắc chung để định lượng các chủng nấm men probiotic trong các mẫu thức ăn chăn nuôi được quy định như sau:

- Chuẩn bị các đĩa petri khô vô trùng và thạch vô trùng được làm tan chảy ở 48 °C ± 1 °C để đổ đĩa;

- Lấy mẫu đại diện trong các điều kiện vô trùng;

- Chuẩn bị huyền phù ban đầu để có được sự phân bố đồng đều các tế bào nấm men trong phần mẫu thử;

- Chuẩn bị các dung dịch pha loãng thập phân tiếp theo của huyền phù ban đầu để giảm số lượng vi sinh vật có trong đơn vị thể tích, để sau khi ủ có thể đếm được các khuẩn lạc;

- Cấy lên các đĩa đã chuẩn bị một lượng thích hợp của dung dịch pha loãng thập phân tối ưu, rót thạch đã chuẩn bị vào đĩa hoặc và dùng que dàn mẫu vô trùng để láng đều dịch cấy;

- Lật ngược các đĩa thạch đã cấy mẫu nuôi 3 ngày ở nhiệt độ 30 °C ± 1 °C hoặc 2 ngày ở 35 °C ± 1 °C đối với các đĩa rót;

- Đếm các khuẩn lạc điển hình, các đặc tính điển hình của nấm men như trong 5.3;

- Sử dụng kính hiển vi để kiểm tra hình thái của các nấm men đã phân lập;

- Tính đơn vị hình thành khuẩn lạc trên gam hoặc kilogam mẫu thử.

Trong đó, nấm men (yeast) theo quy định tại tiểu mục 3.1 Mục 3 Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 13516:2022 về Thức ăn chăn nuôi - Phân lập và định lượng các chủng nấm men probiotic là:

Vi sinh vật hình thành các khuẩn lạc trên thạch chọn lọc dextrose chloramphenicol (oxytetracyclin) chất chiết nấm men chọn lọc theo phương pháp quy định trong Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 13516:2022 về Thức ăn chăn nuôi - Phân lập và định lượng các chủng nấm men probiotic.

Nguyên tắc chung để định lượng các chủng nấm men probiotic trong các mẫu thức ăn chăn nuôi được quy định như thế nào? (Hình từ Internet)

Kiểu hình đặc trưng của khuẩn lạc Saccharomyces cerevisiae trên thạch dextrose chloramphenicol (oxytetracyclin) chất chiết nấm men như thế nào?

Căn cứ tại tiểu mục 5.3 Mục 5 Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 13516:2022 về Thức ăn chăn nuôi - Phân lập và định lượng các chủng nấm men probiotic thì:

Kiểu hình đặc trưng của khuẩn lạc Saccharomyces cerevisiae trên thạch dextrose chloramphenicol (oxytetracyclin) chất chiết nấm men có:

- Màu kem và mờ đục

- Hình dạng không đều

- Kích thước thay đổi (đường kính 1 mm đến 6 mm)

Trên thạch sinh màu:

- Hình tròn

- Lồi đến khum

- Nguyên vẹn (hoàn chỉnh)

- Tím hoa cà/tía

- bề mặt nhẵn hoặc bóng

- Mờ đục

- Kích thước thay đổi (đường kính từ 1 mm đến 3 mm).

Ngoài ra, các khuẩn lạc đã chọn được kiểm tra bằng kính hiển vi bằng cách tạo huyền phù trong 1 giọt nước muối vô trùng 0,85 % trên phiến kính được đậy thích hợp để soi kính hiển vi (ví dụ: sử dụng vật kính dầu). Nấm men có các tế bào lớn với hình dạng và kích thước thay đổi, có thể có chồi.

Thiết bị, dụng cụ để định lượng các chủng nấm men probiotic trong các mẫu thức ăn chăn nuôi được quy định như thế nào?

Theo quy định tại Mục 6 Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 13516:2022 về Thức ăn chăn nuôi - Phân lập và định lượng các chủng nấm men probiotic về thiết bị, dụng cụ như sau:

Thiết bị, dụng cụ

Sử dụng các thiết bị, dụng cụ của phòng thử nghiệm vi sinh thông thường và cụ thể như sau.

6.1 Thiết bị khử trùng khô (tủ sấy) và khử trùng ướt (nồi hấp áp lực)

Theo quy định trong TCVN 6404 (ISO 7218).

6.2 Tủ ấm, có thể duy trì nhiệt độ ở 30 °C ± 1 °C và 35 °C ± 1 °C.

6.3 Nồi cách thủy, có thể duy trì nhiệt độ ở 48 °C ± 1 °C.

6.4 Thiết bị trộn

Sử dụng bộ trộn thích hợp có hai tốc độ (18 000 r/min và 22 000 r/min), kèm theo cốc 1 L được khử trùng 1 h ở 170 °C đến 180 °C.

6.5 Bộ khuấy trộn, ví dụ: vortex hoặc loại tương đương.

6.6 Nồi hấp, hoặc dụng cụ tương đương để làm tan chảy thạch mà không hấp áp lực.

Sử dụng nồi cách thủy đun sôi (hoặc nồi hấp) để chuẩn bị các lượng 500 ml thạch, trong khi bộ chuẩn bị môi trường và bộ rót đĩa được sử dụng nhiều hơn 1 000 ml.

6.7 Cân, có thể cân chính xác đến hai chữ số thập phân.

6.8 Chai có nắp vặn, dung tích 25 ml và 1000 ml.

6.9 Pipet tự động và các đầu tip vô trùng để phân phối các lượng 100 μl và 1 ml, đầu tip rộng.

6.10 Que dàn mẫu vô trùng, hình chữ L bằng thủy tinh hoặc kim loại

6.11 Đĩa Petri vô trùng, đường kính 90 mm.

6.12 Tủ cấy vô trùng.

6.13 Kính hiển vi, có hình ảnh tương phản pha (phóng đại 400 lần) và được sử dụng với nhúng dầu (1000 lần).

Như vậy, thiết bị, dụng cụ để định lượng các chủng nấm men probiotic trong các mẫu thức ăn chăn nuôi được quy định cụ thể như trên.