Có thể xác định protein có thể ngâm chiết trong găng tay y tế sử dụng một lần bằng phương pháp nào?

Nội dung chính

• Xác định protein có thể ngâm chiết trong găng tay y tế sử dụng một lần bằng phương pháp nào?
• Báo cáo thử nghiệm sau khi tiến hành phương pháp thử nghiệm gồm những nội dung gì?
• Thực hiện phương pháp thử nghiệm xác định protein có thể ngâm chiết trong găng tay y tế sử dụng một lần dựa trên nguyên tắc nào?

Xác định protein có thể ngâm chiết trong găng tay y tế sử dụng một lần bằng phương pháp nào?

Căn cứ tiểu mục 5.3 Mục 5 Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 13415-3:2021 (BS EN 455-3:2015) về Găng tay y tế sử dụng một lần - Phần 3: Yêu cầu và thử nghiệm đánh giá sinh học (gọi tắt là TCVN 13415-3:2021 (BS EN 455-3:2015)), đối với việc xác định protein có thể ngâm chiết trong găng tay y tế sử dụng một lần, có thể tiến hành bằng phương pháp sau:

"5.3 Protein có thể ngâm chiết

Phương pháp thử nghiệm để xác định phân tích protein có thể ngâm chiết phải là phương pháp Lowry cải tiến nêu trong Phụ lục A hoặc một phương pháp đã xác thực một cách thích hợp khác đã được chứng tỏ tương quan với phương pháp Lowry cải tiến.

CHÚ THÍCH 1: Ví dụ về phương pháp phân tích đã xác thực được nêu trong Phụ lục C.

CHÚ THÍCH 2: Các phương pháp miễn dịch học trong Phụ lục B hiện vẫn chưa được xác thực theo phương pháp Lowry cải tiến nhưng có thể tương quan với dữ liệu đáp ứng lâm sàng."

Đồng thời, tại Mục A.1 Phụ lục A ban hành kèm theo TCVN 13415-3:2021 (BS EN 455-3:2015) có quy định như sau:

"A.1 Phạm vi áp dụng

Phương pháp này dùng để xác định lượng protein có thể ngâm chiết xuất được trong nước ở găng y tế làm từ cao su tự nhiên (NR). Nó đã được xác thực trong các thử nghiệm liên phòng thí nghiệm. Giới hạn định lượng dưới là khoảng 10 μg protein trên mỗi g găng tay (tức là 2 μg protein trên mỗi ml dịch chiết) tùy thuộc vào trọng lượng găng tay.

Các hóa chất như chất hoạt tính bề mặt, chất gia tốc và chất chống oxy hóa được thêm vào mủ cao su tự nhiên trong quá trình sản xuất găng tay có thể cản trở sự phát triển màu trong quá trình xác định, một số vật liệu có thể làm giảm sự phát triển màu trong khi những vật liệu khác có thể làm tăng màu sắc. Nếu phương pháp thử nghiệm mang lại kết quả có vẻ sai do các chất cản trở, khi đó có thể sử dụng bất kỳ phương pháp phân tích axit amin nào đã được xác thực (ví dụ xem phương pháp nêu trong Phụ lục C).

Người sử dụng phương pháp này phải quen thuộc với thực hành thông thường trong phòng thí nghiệm.

CHÚ THÍCH: Phương pháp này không có mục đích giải quyết tất cả các vấn đề an toàn, nếu có, liên quan đến việc sử dụng nó. Người sử dụng có trách nhiệm thiết lập các thực hành an toàn và sức khỏe thích hợp và đảm bảo tuân thủ mọi điều kiện quy định của quốc gia."

Từ những quy định trên, có thể thấy việc xác định protein có thể ngâm chiết trong găng tay y tế sử dụng một lần, cụ thể là găng tay làm tự cao su tự nhiên được tiến hành thông qua phương pháp Lowry.

Xác định protein có thể ngâm chiết trong găng tay y tế sử dụng một lần

Báo cáo thử nghiệm sau khi tiến hành phương pháp thử nghiệm gồm những nội dung gì?

Theo quy định tại Mục 6 TCVN 13415-3:2021 (BS EN 455-3:2015), báo cáo thử nghiệm gồm ít nhất những nội dung sau:

"6 Báo cáo thử nghiệm

Mọi báo cáo thử nghiệm phải bao gồm ít nhất các thông tin sau:

- viện dẫn tiêu chuẩn này;

- loại găng tay và mã lô sản xuất;

- tên và địa chỉ của nhà sản xuất hoặc nhà phân phối và phòng thử nghiệm, nếu khác;

- ngày thử nghiệm được thực hiện;

- mô tả của phương pháp thử nghiệm đã áp dụng

- kết quả thử nghiệm."

Thực hiện phương pháp thử nghiệm xác định protein có thể ngâm chiết trong găng tay y tế sử dụng một lần dựa trên nguyên tắc nào?

Nguyên tắc tiến hành phương pháp xác định protein có thể ngâm chiết trong nước ở găng tay cao su tự nhiên bằng phương pháp Lowry cải tiến được quy định tại Mục A.2 Phụ lục A ban hành kèm theo TCVN 13415-3:2021 (BS EN 455-3:2015) như sau:

"A.2 Protein hòa tan trong nước được chiết xuất vào một dung dịch đệm và sau đó được kết tủa bởi các axit với sự có mặt natri deoxycholate để cô đặc chúng và tách chúng khỏi các chất hòa tan trong nước có thể gây trở ngại cho việc xác định. Các protein kết tủa được hòa tan lại trong kiềm và được định lượng bằng đo màu trong phương pháp Lowry cải tiến. Thử nghiệm này dựa trên phản ứng của protein với đồng và thuốc thử Folin trong môi trường kiềm để tạo ra màu xanh đặc trưng. Các phép đo quang phổ được thực hiện ở một bước sóng cố định trong khoảng 600 nm đến 750 nm."

Thuốc thử để thực hiện thí nghiệm đồng thời được quy định tại Mục A.3 Phụ lục A ban hành kèm theo TCVN 13415-3:2021 (BS EN 455-3:2015), gồm:

"A.3 Thuốc thử

A.3.1 Yêu cầu chung

Bất cứ khi nào cần nước, nên sử dụng nước cất hai lần hoặc nước có chất lượng tương đương. Tất các các chất thử khác đều nên được phân tích chất lượng.

A.3.2 Dịch dùng để chiết

A.3.2.1 N-tris-[Hydroxymethyl]-methyl-2-aminoethanesulfonic acid (TES).

Muối hemisodium

A.3.2.2  Dịch đệm 0,1 M, được chuẩn bị bằng cách pha loãng 24 g TES (A.3.2.1) trong một lít nước. Có thể sử dụng bất kỳ hệ thống đệm tương đương nào miễn là dung dịch đó có khả năng tạo đệm đủ để duy trì pH 7,4 ± 0,2 trong dịch chiết được từ găng tay.

Chuẩn bị một lượng đủ để chiết găng tay (A.6.2), chuẩn bị các dung dịch protein chuẩn (A.6.3.2) và mẫu trắng.

A.3.2.3  Dung dịch nhuộm, bromophenol blue, dung dịch NaCI, chuẩn bị bằng cách pha loãng 100 g xanh bromophenol trong một lít nước. Chuẩn bị một dung dịch mới mỗi 4 tuần.

A.3.3 Thuốc thử xét nghiệm protein

CHÚ THÍCH: Các thuốc thử có thể được chuẩn bị từ các hóa chất off-shelf hoặc được mua dưới dạng bộ thuốc thử thương mại. Phương pháp thử nghiệm dùng cho tiêu chuẩn này đã được xác thực với một bộ thuốc thử thương mại.

A.3.3.1  Thuốc thử A Thuốc thử đồng (tartate đồng có tính kiềm hoặc dung dịch citrate đồng).

A.3.3.2  Thuốc thử B Thuốc thử Folin pha loãng.

A.3.4  NaOH, dung dịch 0,1 M.

A.3.5  Natri deoxycholate (DOC), 3,47 nM, chuẩn bị bằng cách pha 0,15 g natri deoxycholate trong nước và pha loãng với nước tới 100 ml. Không sử dụng dung dịch này quá 4 tuần sau khi chuẩn bị.

A.3.6  Axit trichloroacetic (TCA), 4,4 mM trong nước, được chuẩn bị bằng cách pha 72 g TCA trong nước và pha loãng với nước tới 100 ml.

A.3.7  Axit phosphotungstic (PTA), được chuẩn bị bằng cách pha 72 g PTA trong nước và pha loãng với nước tới 100 ml.Không sử dụng dung dịch này quá 4 tuần sau khi chuẩn bị.

A.3.8 Ovalbumin, từ trứng gà, được đông lạnh, không chứa muối."

Như vậy, phương pháp Lowry cải tiến được dùng để xác định protein có thể ngâm chiết trong nước ở găng tay cao su tự nhiên. Theo đó, các nguyên tắc thực hiện cũng như thuốc thử có thể sử dụng được quy định cụ thể trong Tiêu chuẩn trên.